I. Was ist eine Zellkulturflasche?
Eine Zellkulturflasche ist ein gängiges Laborinstrument für die Zellkultur. Sie besteht aus hochwertigem Polystyrol (PS) und wird mithilfe von hochpräzisen Formen und vollautomatisierten Produktionsprozessen hergestellt. Das Produkt wird für die Zellkultur im Labor verwendet; seine hervorragenden optischen Eigenschaften erleichtern die mikroskopische Beobachtung, und die Oberfläche ist TC-behandelt, um eine bessere Zelladhäsion zu erzielen.
II. Beimpfen der Zellsuspension in die Kulturflasche
1. Mischen der Zellsuspension: Bereiten Sie die Zellsuspension entsprechend der benötigten experimentellen Konzentration vor und mischen Sie sie gründlich in einer Kulturflasche, einem Kulturgefäß oder einem anderen Behälter.
2. Die Zellsuspension mithilfe einer Pipette oder Pasteurpipette langsam und gleichmäßig in den Zellkulturkolben geben und dabei Spritzer und Schaumbildung vermeiden. (Bei mehrschichtigen Zellkulturkolben ist besonders auf eine gleichmäßige Flüssigkeitsverteilung zu achten; durch Neigen oder Drehen des Kolbens kann ein gleichmäßiger Flüssigkeitsfluss in jede Schicht gewährleistet werden.)
3. Den Kulturkolben vorsichtig auf eine stabile Arbeitsfläche stellen, sodass die glatte, ebene Seite nach oben und die Gradientenseite nach unten zeigt (stapelbar für einfache Handhabung).
4. Den Zellkulturkolben in einen geeigneten Inkubator stellen und die entsprechende Temperatur (z. B. 37 °C), Luftfeuchtigkeit und Gaskonzentration (z. B. 5 % CO₂) einstellen.
5. Die Zellen für eine bestimmte Zeit im Kulturkolben wachsen lassen.
III. Wechseln des Kulturmediums
1. Entfernen des alten Kulturmediums: Neigen Sie den Kulturkolben beim Absaugen des Kulturmediums in einem 45°-Winkel, sodass die glatte Seite zu Ihnen zeigt. Saugen Sie das alte Kulturmedium vorsichtig mit einer Pasteurpipette oder Pipette ab und achten Sie darauf, anhaftende Zellen nicht abzulösen. Falls sich viele suspendierte Zellen oder Verunreinigungen im Kulturmedium befinden, waschen Sie die Zellen ein- bis zweimal mit PBS-Puffer, um diese Verunreinigungen zu entfernen.
2. Hinzufügen von neuem Kulturmedium: Geben Sie nach dem Entfernen des alten Kulturmediums eine geeignete Menge Kulturmedium in den Kulturkolben. Fügen Sie das Medium von der Seitenwand des Kulturkolbens hinzu, um einen direkten Kontakt mit den anhaftenden Zellen zu vermeiden. Die Menge des hinzugefügten frischen Kulturmediums sollte anhand der Zelldichte und Wachstumsrate bestimmt werden, um ein normales Zellwachstum zu gewährleisten.
IV. Zellgewinnung
1. Entfernen des alten Kulturmediums: Das alte Kulturmedium vorsichtig aus dem Zellkulturkolben absaugen, eine geeignete Menge PBS-Puffer zugeben und vorsichtig schütteln, um eventuelle Mediumreste zu entfernen und die Zelloberfläche zu reinigen.
2. Verdauung und Zellzyklusstopp: Eine geeignete Menge Trypsin (≥ 3 ml) zugeben und 2–3 Minuten inkubieren. Anschließend die Verdauung mit serumhaltigem Kulturmedium stoppen.
3. Zellgewinnung: Die Zellsuspension mithilfe einer Pipette (Schaumbildung vermeiden) in ein Zentrifugenröhrchen überführen und 5 Minuten bei geeigneter Drehzahl (z. B. 800 U/min) zentrifugieren, damit sich die Zellen am Boden des Zentrifugenröhrchens absetzen können.
4. Gewinnung des Zellpräzipitats: Nach der Zentrifugation den Überstand vorsichtig aus dem Zentrifugenröhrchen entfernen (das Zellpräzipitat nicht verwerfen). Das Zellpräzipitat aus dem Zentrifugenröhrchen entnehmen und für die weitere Verarbeitung im Experiment verwenden.